调节性T细胞（Tregs）是CD4＋T细胞的一个组成部分，可抑制其它T细胞的免疫反应。在健康人外周血中，Tregs约占CD4＋T细胞的3-5％。Treg具有以下部分或全部特征：CD25高表达、FoxP3阳性(胞内)、CD127低表达 。

为了减少胞内染色所需的固定、破膜等时间，设计了以CD25和CD127为主的方案，以CD25hi CD127－定义的Treg中，仅13％细胞不表达FoxP3，故一般情况下可代替FoxP3检测 。

在本方案中，除了上述所有的抗体，又通过CD39，CD73，CD45RA，CD45RO和PD-1的表达在功能和表型上进一步表征Treg。

CD39：与Tregs的高免疫抑制活性相关；

CD73：有助于Treg和其他抑制性免疫细胞以及肿瘤微环境的抑制功能；

CD45RA和CD45RO：分别定义初始和活化的Treg；

PD-1：负调节Treg功能；

最后，包括CD38和HLA-DR，这两种T细胞活化标记的差异表达识别出与疾病控制完全相关的亚组。

冷冻或新鲜的PBMC。

如果该方案在CytoFLEX流式细胞仪上进行检测研究，推荐的机型为CytoFLEX LX(UV-B-R-V-Y)，相应的产品信息可关注文末“广州格卢瑞”公众号进行了解。

A图设门策略：排除粘连体（FSC-A/ FSC-H）→选Aqua-CD3+排除死细胞（Aqua/CD3图）→排除任何用染料聚集体非特异性标记的细胞（灰色框）和淋巴细胞→CD4 +T细胞和CD8 + T细胞用于进一步分析。

B图： CD4+和CD8+T细胞活化的评估： 分别对A图中CD4+T细胞和CD8+ T细胞亚群内研究CD25，CD38，CD39，CD45RA，CD45RO，CD73，CD127，HLA-DR和PD-1的表达水平。 

Treg的鉴定：在CD4+ T细胞内，Treg是CD127- CD25hi的一群细胞。

C图：Treg表型： 对Treg（CD127- CD25hi）进一步分析，以 CD39/CD73，CD45RA/CD45RO以及CD38/HLA-DR和CD45RA/PD-1进行建图，Gate到Treg（CD127- CD25hi），以研究Treg的成熟状态，调节潜力和细胞活化状态。

D图：Treg活化的研究。说明了总Treg表达的活化标记组合的比例

Mahnke YD, Beddall MH, Roederer M. OMIP‐015: Human regulatory and activated T‐cells without intracellular staining. Cytometry A. 2013 Feb;83(2):179-81. doi: 10.1002/cyto.a.22230.  PMID: 23166007

*本文由贝克曼库尔特公司流式技术支持高敏供稿。文中所提及产品（CytoFLEX）仅用于科研，不用于临床诊断。